Resumo Introdução: Diabetes mellitus (DM) é uma doença crônica caracterizada por hiperglicemia levando à nefropatia diabética (ND). Mostramos que P2X7, um receptor purinérgico, foi altamente expresso na DM; entretanto, quando o estresse oxidativo foi controlado, o NO renal recuperou-se, e a ativação deste receptor permaneceu significativamente reduzida. Este estudo objetivou avaliar a influência do NO no P2X7 e a apoptose em células mesangiais imortalizadas de camundongos (CMiC) cultivadas em meio de glicose elevada (GE). Métodos: CMiCs foram cultivadas em meio DMEM e expostas à glicose normal (GN), manitol (MA), ou GE. A viabilidade celular foi avaliada por contador automático. Sobrenadantes foram coletados para quantificação de NO, e foram extraídas proteínas para análise de NO sintases (iNOS e eNOS), caspase-3, e P2X7. Resultados: A viabilidade celular permaneceu acima de 90% em todos os grupos. Houve aumento significativo na proliferação de células na GE comparado com MA e GN. NO, iNOS, caspase-3 e P2X7 foram significativamente aumentados na GE comparados com GN e MA, sem alterações na eNOS. Observamos que houve correlação forte e significativa entre P2X7 e NO. Discussão: O principal achado foi que a produção de NO pela iNOS foi positivamente correlacionada com aumento de P2X7 em CMs sob condições de GE, mostrando que existe um estímulo comum entre eles e que o NO interage com a via do P2X7, contribuindo para apoptose na DM experimental. Estes achados podem ser relevantes para estudos de alvos terapêuticos para a prevenção e/ou tratamento de danos renais induzidos por hiperglicemia para retardar a progressão da ND.

Abstract Introduction: Diabetes mellitus (DM) is a chronic disease characterized by hyperglycemia that leads to diabetic nephropathy (DN). We showed that P2X7, a purinergic receptor, was highly expressed in DM; however, when oxidative stress was controlled, renal NO recovered, and the activation of this receptor remained significantly reduced. The aim of this study was to assess the influence of NO on the P2X7 and apoptosis in mouse immortalized mesangial cells (MiMC) cultured in high glucose (HG) medium. Methods: MiMCs were cultured with DMEM and exposed to normal glucose (NG), mannitol (MA), or HG. Cell viability was assessed by an automated counter. Supernatants were collected for NO quantification, and proteins were extracted for analysis of NO synthases (iNOS and eNOS), caspase-3, and P2X7. Results: Cell viability remained above 90% in all groups. There was a significant increase in the proliferation of cells in HG compared to MA and NG. NO, iNOS, caspase-3, and P2X7 were significantly increased in HG compared to NG and MA, with no changes in eNOS. We observed that there was a strong and significant correlation between P2X7 and NO. Discussion: The main finding was that the production of NO by iNOS was positively correlated with the increase of P2X7 in MCs under HG conditions, showing that there is a common stimulus between them and that NO interacts with the P2X7 pathway, contributing to apoptosis in experimental DM. These findings could be relevant to studies of therapeutic targets for the prevention and/or treatment of hyperglycemia-induced kidney damage to delay DN progression.

ABSTRACT Objectives: The purpose of this study was to investigate the heterogeneity of the association between glycemic variability and oxidative stress markers in T1DM patients under daily life insulin treatment. Subjects and methods: We studied, in a cross-sectional analysis, 76 T1DM patients without clinical chronic diabetes complications and 22 healthy individuals. Were evaluated the short-term glycemic variability (STGV), long-term glycemic variability (LTGV), oxidative stress markers [8-isoprostaglandin-F2α (Ur-8-iso-PGF2α), nitric oxide (NO), thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) and erythrocytes reduced/oxidized glutathione (GSH/GSSG)] and biochemical dosages (glycaemia, HbA1c, lipidogram, albuminuria). Results: Plasmatic NO was positively associated with LTGV (last year average of HbA1c) (8.7 ± 1.6% or 71 ± 18 mmol) (rS: 0.278; p: 0.042). Plasmatic TBARS, erythrocytes GSH/GSSH and Ur-8-iso-PGF-2α didn't show correlation with glycemic variability. GSH/GSSG was inversely correlated with LDL-cholesterol (rS: - 0.417; p: 0.047) and triglycerides (rS: −0.521; p: 0.013). Albuminuria was positive correlated with age (rS: 0.340; p: 0.002), plasmatic NO (rS: 0.267; p 0.049) and TBARS (rS: 0.327; p: 0.015). Conclusion: In daily life insulin treatment, young T1DM patients have higher plasmatic NO than healthy subjects. However, the correlation between glycemic variability and oxidative stress markers is heterogeneous. Lipid profile and albuminuria are associated with different oxidative stress markers. These data collaborate to explain the controversial results in this issue.

RESUMO Introdução: A calcificação vascular é uma complicação comum da doença renal crônica. O fator de diferenciação osteoblástica (Cbfa1) está presente em cortes histológicos das artérias de pacientes com doença renal em estágio terminal. As células do músculo liso vascular (CMLV) podem desdiferenciar para células do tipo osteoblastos, possivelmente pela regulação positiva da Cbfa1. Há evidências de que a produção de óxido nítrico (NO) pode ter um papel importante na regulação do metabolismo dos osteoblastos. O objetivo deste estudo é avaliar se o aumento da expressão de NO/iNOS causa um aumento na expressão de cbfa1 nas CMLV. Métodos: As CMLV foram obtidas da artéria renal de ratos machos Wistar, tratados por 72 horas com lipopolissacarídeo (LPS), ß-glicerofosfato (BGF), um doador de fosfato e aminoguanidina (AG), um inibidor da iNOS, nos seguintes grupos: CTL (controle), LPS, BGF, LPS + BGF e LPS + AG. A síntese de NO foi determinada por quimioluminescência. As expressões de mRNA de Cbfa1 e iNOS foram analisadas por RT-PCR, a expressão da proteína Cbfa1 por imunohistoquímica e viabilidade celular por laranja de acridina. Resultados: As expressões de mRNA de Cbfa1 e iNOS foram maiores em LPS e LPS + BGF v.s. CTL (p < 0,05) e menores em LPS + AG v.s. LPS (p <0,05). O Cbfa1 nos grupos LPS e LPS + BGF também resultou em um valor maior em comparação ao CTL (p < 0,05), e no LPS + AG foi menor em comparação ao LPS (p < 0,05). NO foi maior no LPS e LPS + BGF em comparação ao grupo CTL (p < 0,05) e menor no LPS + AG em comparação ao grupo LPS (p < 0,05). A viabilidade celular não mostrou diferença estatística entre os grupos. Conclusão: Este estudo mostrou que o aumento da expressão de NO/iNOS causa um aumento na expressão de cbfa1 nas CMLV.

ABSTRACT Introduction: Vascular calcification is a common complication of chronic kidney disease. Osteoblast differentiation factor (Cbfa1) is present in histologic sections of arteries from patients with end-stage renal disease. Vascular smooth muscle cells (VSMC) can dedifferentiate to osteoblast-like cells, possibly by up-regulation of Cbfa1. There is evidence that the production of nitric oxide (NO) may have an important role in the regulation of osteoblast metabolism. The aim of this study is to evaluate whether increased NO/iNOS expression causes an increase in cbfa1 expression in VSMC. Methods: VSMC were obtained from renal artery of Wistar male rats, treated for 72 hours with lipopolysaccharide (LPS), ß-glycerophosphate (BGF), a donor of phosphate and aminoguanidine (AG), an inhibitor of iNOS, in the following groups: CTL (control), LPS, BGF, LPS + BGF, and LPS + AG. NO synthesis was determined by chemiluminescence. Cbfa1 and iNOS mRNA expressions were analyzed by RT-PCR, Cbfa1 protein expression by immunohistochemistry and cellular viability by acridine orange. Results: Cbfa1 and iNOS mRNA expressions were higher in LPS and LPS+ BGF vs CTL (p < 0.05), and they were lower in LPS+AG vs LPS (p < 0.05). The Cbfa1 in the groups LPS and LPS+BGF also resulted in a higher value compared to CTL (p < 0.05), and in LPS+AG it was lower compared to LPS (p < 0.05). NO was higher in LPS and LPS+BGF compared to CTL group (p < 0.05) and lower in LPS + AG compared to LPS group (p < 0.05). Cellular viability showed no statistical difference among groups. Conclusion: This study showed that increased NO/iNOS expression causes an increase in cbfa1 expression in VSMC.

PURPOSE: To describe a technique to obtain guinea pigs cochlear fluids and measure nitric oxide (NO) concentration. METHODS: Six guinea pigs were used and sacrificed. The cochlear fluids collected for measurement of NO, performed by chemiluminescence (NOA 280). RESULTS: Through the chemiluminescence was possible to analyze the concentration of NO in cochlear fluids obtained. Average levels of nitric oxide from guinea pigs was 12.55 µM. CONCLUSION: It is possible to obtain nitric oxide cochlear fluids, with this technique and nitric oxide concentration measure by chemiluminescence, a quantitative and more precise method.

RESUMO Objetivo: Traçar o perfil epidemiológico da amostra, verificar a presença de sintomas de depressão em pacientes com diagnóstico prévio de síndrome coronariana aguda e identificar os fatores contribuintes para a manutenção dos sintomas de depressão na amostra estudada. Métodos: Estudo transversal realizado no Ambulatório de Cardiologia da Universidade Federal de São Paulo. Foi aplicado um instrumento elaborado pelos autores, baseado em estudos semelhantes, com dados de identificação dos pacientes, questões relacionadas ao acompanhamento psicológico, relacionamento com familiares e amigos, além da aplicação do Inventário de Depressão de Beck. Resultados: A amostra constou de 200 pacientes, sendo 127 (63,5%) do sexo masculino. A média de idade foi de 60,19 anos com um desvio padrão de 9,38, com idade mínima de 36 e máxima de 81 anos; 164 (82%) negaram ter feito qualquer acompanhamento com psicólogo ou psiquiatra na fase após o diagnóstico e tratamento da síndrome coronariana aguda. Na aplicação do Inventário de Depressão de Beck, 67 (33,5%) apresentaram escores entre 0 e 4, indicando sintomas leves de depressão; 72 (36%) apresentaram escores entre 5 e 9, indicando sintomas leves a moderados; e 61 (30,5%) apresentaram escores maiores que 9, indicando sintomas moderados a graves. Conclusão: Avaliação e acompanhamento multiprofissional podem ajudar o paciente no enfrentamento da doença além de proporcionar maior adesão à terapia farmacológica e início das mudanças de hábitos de vida.

ABSTRACT Objective: To trace an epidemiological profile, to verify presence of depressive symptoms in patients with previous diagnosis of acute coronary syndrome and to identify factors that contribute to maintenance of depressive symptoms in the sample. Methods:A cross-section study carried out at the Cardiology Outpatients Clinics of Universidade Federal de São Paulo. An instrument prepared by the authors was used, which was based on similar studies with patient identification data, questions related to the psychological follow-up, relationship with family members and friends, in addition to use of the Beck Depression Inventory. Methods: A cross-section study carried out at the Cardiology Outpatients Clinics of Universidade Federal de São Paulo. An instrument prepared by the authors was used, which was based on similar studies with patient identification data, questions related to the psychological follow-up, relationship with family members and friends, in addition to use of the Beck Depression Inventory. Results: A total of 200 patients were interviewed, 127 (63.5%) were male. The mean age was 60.19 years with a standard deviation of 9.38, minimum age of 36 years and maximum of 81 years; 164 (82%) denied any follow-up with a psychologist or psychiatrist in the phase after acute coronary syndrome diagnosis and treatment. In the utilization of Beck Depression Inventory, 67 (33.5%) presented scores between 0 and 4, indicating mild depressive symptoms; 72 (36%) had scores between 5 and 9, indicating mild to moderate depressive symptoms, and 61 (30.5%) presented scores greater than 9, which point out moderate to severe depressive symptoms. Conclusion: The evaluation and multiprofessional follow-up can help patients cope with the illness in addition to providing greater compliance to drug therapy and beginning changes in life habits.

Este estudo foi delineado para investigar a presença de relação entre a intensidade de sinal em FLAIR e níveis de citocinas, óxido nítrico (NO) e glutamato no hipocampo de pacientes com epilepsia do lobo temporal refratária, associada com esclerose mesial (TLE-MTS). Vinte e nove pacientes foram selecionados através de análise clínica e de ressonância magnética (RM) que foram submetidos a cortico-amigdalo-hipocampectomia para o controle das crises. Os níveis de glutamato foram avaliados por HPLC, as citocinas TNFα e IL1β por ELISA e os níveis de NO via NO system. Avaliamos também por imuno-histoquímica a expressão de IL1β e CD45 em tecidos controles e com esclerose. Tecido controle foi obtido após autópsia de indivíduos mortos sem disfunções inflamatórias e neurológicas (n=10). A concentração de glutamato se mostrou reduzida no tecido TLE-MTS (p<0,001) sugerindo aumento na liberação desse neurotransmissor. TNFα e IL1β também apresentaram níveis elevados no hipocampo dos pacientes (p<0,05), demonstrando um processo inflamatório crônico. Houve uma correlação linear positiva entre a intensidade do sinal em FLAIR e os níveis de NO e IL1β. Em contraste, uma correlação linear negativa foi encontrada entre a intensidade do sinal em FLAIR e níveis de glutamato no hipocampo com esclerose. Infiltrado linfocitário hipocampal também foi visualizado pela imuno-marcação com CD45 em pacientes com TLE-MTS. Esses dados mostraram uma associação entre alteração de sinal na RM e marcadores inflamatórios em pacientes com TLE-MTS.

We investigated a relationship between the FLAIR signal found in mesial temporal sclerosis (MTS) and inflammation. Twenty nine patients were selected through clinical and MRI analysis and submitted to cortico-amygdalo-hippocampectomy to seizure control. Glutamate, TNFα, IL1, nitric oxide (NO) levels and immunostaining against IL1β and CD45 was performed. Control tissues (n=10) were obtained after autopsy of patients without neurological disorders. The glutamate was decreased in the temporal lobe epilepsy (TLE) -MTS group (p<0.001), suggesting increased release of this neurotransmitter. The IL1β and TNFα were increased in the hippocampus (p<0.05) demonstrating an active inflammatory process. A positive linear correlation between FLAIR signal and NO and IL1β levels and a negative linear correlation between FLAIR signal and glutamate concentration was found. Lymphocytes infiltrates were present in hippocampi of TLE patients. These data showed an association between hippocampal signal alteration and increased inflammatory markers in TLE-MTS.

Suplementos nutricionais, supostamente, capazes de potencializar a produção endógena de óxido nítrico (NO) têm experimentado crescente popularidade entre os indivíduos fisicamente ativos. Diante da carência de informações sobre o assunto, o objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito de um suplemento comercial à base de proteínas e aminoácidos sobre a produção endógena de NO. MÉTODOS: A amostra foi constituída de 12 homens sedentários, mas sem fatores de risco para doenças cardiovasculares. O protocolo de suplementação foi conduzido conforme o arranjo experimental duplo-cego cruzado. Os participantes receberam, aleatoriamente, placebo (PLA) ou suplemento proteico (SP), em dois momentos diferentes, separados por uma semana. Com o intuito de determinar a concentração plasmática de NO, amostras de sangue foram coletadas antes (24h e imediatamente antes) e depois (30 e 60 minutos) do consumo da substância PLA ou do SP. RESULTADOS: Não foi observada alteração na concentração plasmática de NO após a ingestão do SP em comparação com o PLA (pós-suplementação 30min - PLA: 19,3 ± 4,7µmol.L- 1 vs. SP: 18,9 ± 4,4µmol.L-1 e pós-suplementação 60min - PLA: 21,3 ± 6,5µmol.L-1 vs. SP: 20,3 ± 4,9µmol.L-1). Também não foi verificada alteração da pressão arterial. CONCLUSÃO: O suplemento nutricional à base de proteínas e aminoácidos, testado no presente estudo, não potencializou a produção endógena de NO.

Nutritional supplements, theoretically able to increase endogenous nitric oxide (NO) production have experienced great popularity among physically active individuals. AIM: scientific evidence available regarding this issue is scarce. Therefore, the purpose of this study was to evaluate the effect of a dietary supplement commercialized as a nitric oxide booster. MATERIALS AND METHODS: twelve sedentary men with no risk factors for cardiovascular diseases were supplemented with placebo or protein in two different occasions. The present study was conducted in a cross double-blind design. In order to assess plasmatic NO concentration, blood samples were obtained before (24hs and immediately before) and after (30 and 60 minutes) consumption of placebo (PLA) or protein supplement (SP). RESULTS: there was no difference in plasmatic nitric oxide concentration between both trails (Post-supplementation 30 min - PLA: 19.3±4.7 µmol.L-1 vs. SP: 18.9±4.4 µmol.L-1 and Post-supplementation 60 min - PLA: 21.3±6.5 µmol.L-1 vs. SP: 20.3±4.9 µmol.L-1). In addition, no difference was detected for arterial blood pressure. CONCLUSION: the dietary supplement analyzed in the present study failed to increase nitric oxide endogenous production.